Witaj ponownie!
Mail Grupowy pomaga Twojej grupie sprawnie się komunikować, dzielić notatkami, wydarzeniami i opiniami. Dowiedz się więcej »
Przedmioty Wykładowcy Uczelnie

Mikrobiologiaprzemysłowa - instrukcje do cwiczen- Cwiczenie 5


Uniwersytet Uniwersytet Rolniczy im. Hugona Kołłątaja w Krakowie
Uniwersystet Rolniczy w Krakowie
UR
Uniwersytet Rolniczy imienia Hugona Kołłątaja
Podgląd

Cwiczenie 5.pdf

Podgląd pliku (pełna wersja wyższej jakości po zalogowaniu):


Rysunek 1. Struktura chemiczna witaminy B

12

Zasada metody:

Dodatek witaminy B

12

dyfundującej w głąb podłoża powoduje intensyfikację

wzrostu wzorcowego szczepu bakterii Escherichia coli (DSMZ 4261), co w warunkach

omawianej metody ujawnia się występowaniem kolistych stref wzrostu wokół miejsc

naniesienia witaminy na podłoże, w którym nie widać wzrostu szczepu testowego. Z

wielkości stref, wokół których nastąpił intensywny rozwój bakterii, oblicza się zawartość

witaminy B

12

.

WYKONANIE ĆWICZENIA

Materiały:

1. Kultura Escherichia coli na podłożu płynnym w probówce 2. Składniki podłoże do oznaczania witaminy B

12 3. Barwnik Andrade

Mikrobiologia przemysłowa

MIKROBIOLOGICZNA METODA OZNACZANIA ZAWARTOŚCI

WITAMINY B

12

1



4. Roztwory standardowe witaminy B

12 5. Roztwory badane witaminy B

12 6. Jałowe cylinderki 7. Szczypce i szalki jałowe 8. Jałowe pipety (100μl, 1 ml i 10 ml) 9. Termostat (30°C)

Podłoże płynne do hodowli Escherichia coli

Do hodowli szczepu testowego Escherichia coli stosuje się podłoże płynne o

następującym składzie:

Pepton 2%

Glukoza 0,1%

NaCl 0,25%

Barwnik Andrade:

Woda destylowana 100 ml

Fuksyna kwaśna 0,2 mg

pH = 6,8 – 7,2

Oznaczanie zawartości witaminy B

12

w roztworach wodnych

Przygotować 150 ml podłoża o następującym składzie:

Glukoza 1 %

Laktoza 0,3 %

NH

4

Cl 0,3 %

K

2

HPO

4

0,04 %

NaCl 0,3 %

Cytrynian sodu 0,3 %

Agar 1,5 %

pH = 7,2

Do ustalenia pH stosuje się 10 % roztwór NaOH. Ważne jest utrzymanie

wskazanego pH, które jest optymalne dla rozwoju szczepu testowego, gdyż niższe

uniemożliwia jego rozwój.

Po pasteryzacji do upłynnionego podłoża do oznaczania witaminy B

12

,

ostudzonego do temperatury 45-50°C, dodać 1,5 ml 48-godzinnej kultury szczepu

testowego Escherichia coli oraz taką samą ilość (1,5 ml) barwnika Andrade (do kolbek

zawierających 150ml pożywki). Po dokładnym wymieszaniu wylać pożywkę na płytki

2



Petriego (warstwa agaru powinna być nie mniejsza niż 5mm). Gdy podłoże zestali się

wyciąć otwory w agarze (4 na szalkę) i dodać do nich po 50 μl odpowiednich roztworów

standardowych oraz badanych witaminy B

12

.

Hodowlę prowadzi się w temperaturze 30°C przez 24 godziny, a następnie mierzy

się średnice stref wzrostu bakterii testowych za pomocą podziałki milimetrowej.

3

Współpraca

Wczytywanie...